流動相所用的各種溶劑至少是分析純，盡量使用色譜純試劑。

流動相所用的水要是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。

用前先用0.45um溶劑微孔過濾(器)過濾，除去可能存在的微粒。

流動相建議現(xiàn)用現(xiàn)配，對于含鹽的溶液尤其注意長置會產(chǎn)生細菌或出現(xiàn)沉淀。

此外還得保證儲存流動相的容器清潔。

復(fù)雜樣品可選用0.45um溶劑微孔過濾(器)或樣品預(yù)處理柱對樣品進行預(yù)處理，確保樣品中不含微粒雜質(zhì)。

若樣品不便處理，要使用保護柱。

柱內(nèi)填料污染時，可將柱頭螺絲卸下，用專用工具挖出柱內(nèi)前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修復(fù)。

或以能溶解污染物的流動相按色譜柱使用的相反方向，沖洗色譜柱(約20至30倍柱體積，或視具體情況而定；另外，此時不能接檢測器)，將污染物沖出色譜柱，再按色譜柱標明的使用方向使用。
 

適當減小進樣量或樣品濃度(需要時，可提高檢測器靈敏度)直至峰形和保留時間不再改變，便可消除這種不良影響。

減小進樣量還能改善其分離度。正常情況下，樣品中每種化合物在150×4.6mm柱中進樣量保持在3～50ug范圍內(nèi)，不會引起明顯超載。
 

柱外效應(yīng)(即進樣閥、色譜柱及檢測器間的管路過長、直徑過粗、管路接頭不匹配、有死體積)是影響色譜柱柱效的主要因素之一。

所以在可能的條件下，色譜柱的兩端連接管路要盡可能短，連接管內(nèi)徑盡可能細小，切口務(wù)必平整光滑，盡可能的減小死體積，以防止因樣品擴散造成不能反映色譜柱真實柱效等情況發(fā)生。
 

仔細分析色譜柱內(nèi)填料表面性質(zhì)可知：反相色譜柱填料的表面大約被鍵合相覆蓋了一半，其余的就是未被鍵合的硅醇基團。

所謂的保留是指樣品分子與鍵合相相互作用的結(jié)果。

但是，酸性或堿性化合物與硅膠表面殘存的硅醇基團或金屬雜質(zhì)之間相互作用而引起雙重保留機理，因此，發(fā)生了峰形拖尾。

為了減小峰形拖尾，通常可在流動相加入25mM三乙胺(抑制劑)。三乙胺能與硅醇基團發(fā)生強烈的相互作用，從而降低或阻斷樣品分子與硅醇基團的作用，以保證保留機理正常進行，并大大緩解了峰形拖尾。使用長鏈的硅醇基抑制劑，雖起效較慢，但持續(xù)力較三乙胺長。

因為抑制劑分子中除了胺基與硅醇基團發(fā)生極性作用外，大分子中非極性部分與固定相也會發(fā)生反相作用而產(chǎn)生保留現(xiàn)象。如果將抑制劑加至樣品中，效果會顯著。
 

柱內(nèi)金屬污染(Fe，Ni等)可引起某引些化合物峰形拖尾。金屬可由填料本身帶進，也可由腐蝕性流動相緩慢溶解柱進口的金屬濾片，隨流動相沉積到柱填料中。

例如C18柱填料被金屬污染后，造成酸性/堿性樣品拖尾，可用堿洗/酸洗后再鍵合的填料，得到的峰是尖銳且對稱的。