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EDTA(乙二胺四乙酸)與DTPA(二乙烯三胺五乙酸)HPLC直接分離分享
EDTA DTPA
根據樣品分子結構式可知,EDTA包含兩個氨基(-NH)和四個羧基(-COOH),而DTPA比EDTA多了一個氨基(-NH)和一個羧基(-COOH)。EDTA和DTPA具有多個羧酸基團使其具有強酸性,而氨基則賦予其弱堿性,由于羧酸基團比氨基數量多,因此EDTA和DTPA在溶液中主要表現為酸性。
EDTA和DTPA是市面上常見的螯合劑,部分溶于水,需要借助其螯合作用加入“NaOH”助溶,使其鈉鹽的形式存在。
考慮以上兩個化合物,同時存在酸、堿基團,且極性較大。我們考慮采用同時具有“陰陽離子交換(陽陰離子排斥)+Hilic”作用能力的Comixsil ACRP色譜柱(嵌入了陰離子與陽離子的親水短鏈烷基鍵合硅膠柱)進行分析。
色譜柱
Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm(貨號:FMG-ACRP-EONU)
檢測器條件
ELSD,40℃;2.5L/min
流速
1.0ml/min
柱溫
25℃
進樣體積
10μl
樣品配置
1. 稱取EDTA 3.2mg 加入1ml(70℃)超純水溶解,再加入50μl 1MNaOH混勻過0.22μm濾膜。
2. 稱取DTPA 2.2mg 加入1ml(70℃)超純水溶解,再加入50μl 1MNaOH混勻,再超聲5min過0.22μm濾膜。
3. 混標用移液槍吸取EDTA與DTPA過濾液各200μl等比例混勻,即可。
流動相
T(min)
100mM 甲酸銨溶液(pH 4)
乙腈
25
75
色譜圖:
Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm
空白對照色譜圖(0.05M NaOH)
EDTA樣品色譜圖
DTPA樣品色譜圖
混標色譜圖
空白對照與EDTA、DTPA和混標對比圖
結果分析:
使用Comixsil ACRP 5μ 250*4.6mm色譜柱進行實驗,由色譜圖可見,分離度分別為7.9與7.8,分離情況良好,且理論塔板數>5000(在10000左右),要縮短時間,也可嘗試本款柱子的其他規格(如Comixsil ACRP 3μ 150*4.6mm, 貨號:FMF-ACRP3-EONU)進行改善。同時該方法也可用于CAD, MS檢測器。
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